我G《規(guī)范》(1998 年修訂)在“衛(wèi)生”一章中要求“工作服的選材、式樣及穿戴方式應(yīng)與生產(chǎn)操作和空氣潔凈度級別要求相適應(yīng)，并不得混用。無菌工作必須包蓋全部頭發(fā)、胡須及腳部，并能阻擋人體脫落物。”歐洲GMP 對無菌產(chǎn)品生產(chǎn)的著裝要求有嚴格的規(guī)定，參見表2—18。
表2—18 歐洲GMP 對無菌生產(chǎn)的著裝要求
潔凈度級別著裝要求
A、B 級
①面罩應(yīng)能完全遮住頭發(fā)、胡須，面罩下沿應(yīng)藏到*口中去
②滅毒口罩、無塵手套、滅毒或消毒的鞋套
③褲腳塞人鞋套，袖口塞人手套中
④無菌衣不能脫落纖維和顆粒性物質(zhì)，并能阻擋人體散發(fā)的塵粒
C 級
①頭發(fā)、胡須應(yīng)全部遮住
②單層或雙層褲裝，腰部扎緊
③合適的鞋子或鞋套
④工作服不能脫落纖維和顆粒性物質(zhì)
D 級
①頭發(fā)、胡須應(yīng)全部遮住
②一般的防護工作服
③合適的鞋子或鞋套
④有適當措施防止來自潔凈室外的污染
注：1．外界衣物不能帶到A、B 級的更衣室(應(yīng)換上工作服后進入)。
2．上述潔凈室不得帶人手表、化妝品和shou飾。因此所有需進入無菌實驗室和無菌制造區(qū)(包括100 級及10 000 級區(qū)域)工作的操作工、機修工、QC／QA 取樣人員必須接受更衣程序的確認，并公布合格者的名單，同時規(guī)定時效，超過時效必須進行再次確認，以確保進入無菌室的所有人員是“會穿無菌衣”的。有條件的話，QA 部門應(yīng)攝下每個人的更衣程序并加以保存，作為染菌的研究資料，定期進行檢查。
一、建立更衣的標準操作程序
人員進入無菌區(qū)先得通過氣閘室，但人既不能滅菌、除菌，也不能消毒，以致成為污染無菌環(huán)境的主要威脅。無菌的衣服、鞋套、手套、帽子、口罩以及眼鏡對所有要進入無菌區(qū)的人來說是**必需的。由于無菌服飾可能是控制微生物污染的**好辦法，所以必須教會人們穿戴服飾的正確辦法。更衣的標準操作程序(SOP)必須完備并在任何時候都應(yīng)堅持。更衣程序可因各單位的具體情況而定。例如，用長凳將更衣室一分為二的穿衣程序一般為：
①把需穿著的無菌服置于長凳上。
②一只腳先套上鞋套，把腿橫過長凳，在此之前必須確保鞋套未觸及**間(潔凈級別較低的)地面。另一只腳重復(fù)此動作。
③先戴頭罩然后穿衣，必須注意不能將衣服的任何部分觸及地面。拉緊拉鏈，齊整衣服，
褲腳應(yīng)覆蓋鞋套，袖套須覆蓋整個手臂直**手腕，頭罩要小心地塞進頸部。
④用口罩遮蔽鼻、口，并縛緊。
⑤在全身鏡前檢查著裝，檢查在無菌衣上是否有開口處，按要求作**后整理。
⑥**后戴上無菌手套，手套上部緊縛住袖口。
二、人員的發(fā)菌量
分析G外實驗資料，可以認為人員的發(fā)菌量有以下數(shù)據(jù)可供參考。
①潔凈室內(nèi)當工作人員穿無菌服時，靜止時的發(fā)菌量一般為10～300 個／(min ·人)，軀體一般活動時的發(fā)菌量為150～1000 個／(min ·人)，快步行走時的發(fā)菌量為900—2500 個／(min ·人)。
②咳嗽一次的發(fā)菌量一般為70～700 個／(min ·人)，噴嚏一次的發(fā)菌量一般為4000～60 000 個／(min ·人)。
③穿平常衣服時發(fā)菌量為3300～62000 個／(min ·人)。
④無口罩發(fā)菌量：有口罩發(fā)菌量為(1：7)～(1：14)。
⑤發(fā)菌量：發(fā)塵量為(1 ： 500)～(1：1000)。
可知潔凈室內(nèi)穿無菌衣人員的靜態(tài)發(fā)菌量一般不超過300 個／(min ·人)，動態(tài)發(fā)菌量一般不超過1000 個／(min ·人)。
三、更衣的確認程序
1．確認的程序
①每個受訓(xùn)者事先必須先經(jīng)過無菌操作的培訓(xùn)，如無菌衣穿著的SOP，接觸法取樣的方法，污染控制和無菌操作技術(shù)等。
②進入無菌室前，受訓(xùn)者先要進行更衣的實踐。
③管理人員必須向每個受訓(xùn)者解釋更衣微生物挑戰(zhàn)試驗的程序。
④將微生物挑戰(zhàn)試驗用在3 次更衣程序上。受訓(xùn)者經(jīng)過3 次更衣練習(xí)，直到達到“會穿衣進入無菌室”的程度。
⑤每次挑戰(zhàn)性試驗用Rodac 直接接觸法取樣，取樣點如下：
——每個手套(5 只手指)；
——胸口處(在拉鏈中心**少有1 點)；
——口罩；
——帽兜額頭處；
——防護眼鏡(2 塊鏡片)；
——靴子與工作褲接口處(左右各1 點)；
——前臂。
2．頻率
①每個受訓(xùn)者必須經(jīng)過3 次更衣試驗達標后才能進入無菌室。
②更衣已合格的操作工每年需重復(fù)一次更衣試驗，尚未進入無菌室的人員每4 個月重復(fù)一次。
③當發(fā)現(xiàn)合格人員中有違反更衣程序趨向時，須重復(fù)l～3 次更衣試驗。
3．更衣合格標準
①已證明受訓(xùn)人掌握了更衣程序、污染控制和無菌技術(shù)。
②資料和錄像顯示出受訓(xùn)人3 次更衣試驗的程序都是正確的。
③3 次試驗的微生物檢測結(jié)果在合格標準內(nèi)。參考合格標準如下表所示。采樣點參考標準(Rodac 法)／CFU·皿”采樣點參考標準(Rodac 法)／CFU·皿”
采樣點        CFU·皿        采樣點        CFU·皿
手套        ≤3        前額        ≤5
胸口        ≤5        眼鏡        ≤10
前臂        ≤5        靴子—褲子接合處        ≤5#p#分頁標題#e#
口罩        ≤10
 
 
 
 
 
 
 
 
關(guān)于無菌工藝驗證

典型的無菌原料藥精制生產(chǎn)工藝為：將原材料配制成溶液－除菌過濾－結(jié)晶－過濾－洗滌－干燥－粉碎－分裝。
在上述的滅菌生產(chǎn)工藝中，除了除菌過濾外，還包括設(shè)備滅菌、包裝材料滅菌、無菌衣物滅菌等等。這些滅菌過程經(jīng)過驗證能保證從非無菌狀態(tài)轉(zhuǎn)化成無菌狀態(tài)。但是無菌原料藥的生產(chǎn)過程是精制過程和上述這些滅菌過程的組合，或者稱之為無菌工藝，這種無菌工藝只有經(jīng)過驗證才能確保產(chǎn)品的無菌性能可靠。驗證過程一般是選擇合適的介質(zhì)模擬生產(chǎn)流程，使介質(zhì)流經(jīng)整個生產(chǎn)系統(tǒng)，然后對模擬介質(zhì)培養(yǎng)，觀察是否有細菌長出。如果系統(tǒng)中有染菌的因素存在，在對模擬介質(zhì)的培養(yǎng)中就會被發(fā)現(xiàn)。

1 驗證前的準備

無菌工藝驗證是生產(chǎn)、質(zhì)量、工程和其它部門之間廣泛合作的一項工作。在驗證之前需要做一些準備工作。

1.1 生產(chǎn)設(shè)施的設(shè)計和確認
生產(chǎn)設(shè)施的設(shè)計應(yīng)能使?jié)撛诘奈廴窘档偷?*小。生產(chǎn)設(shè)施應(yīng)易于清潔和消毒；產(chǎn)品或物料敞開之處的空氣要有一定的品質(zhì)要求；溫度和濕度的控制要適宜，使穿著無菌衣的操作人員感到舒適，應(yīng)能防止污染和交叉污染等等。其中單一因素對無菌操作的具體影響也許并不是很明顯，但如果設(shè)施設(shè)計不夠全面，這種影響將非常顯著。應(yīng)重視設(shè)計上的細節(jié)，減少污染源，以確保無菌生產(chǎn)得以實施。無菌工藝驗證是執(zhí)行難度較大的驗證之一，參與者應(yīng)充分意識到設(shè)施的設(shè)計和確認是驗證成功的主要因素。

1.2 公用工程的確認
影響產(chǎn)品質(zhì)量的公用工程如蒸汽、壓縮空氣、加熱、制冷、水系統(tǒng)等都應(yīng)經(jīng)過確認。公用工程是生產(chǎn)得以正常實施的保證之一。若其中任何一個系統(tǒng)出現(xiàn)故障，將會使產(chǎn)品發(fā)生潛在的或嚴重的污染。應(yīng)有公用工程的維護計劃并按計劃執(zhí)行，目的就是不讓系統(tǒng)發(fā)生故障，保證生產(chǎn)的順利進行，而不是發(fā)生故障后去修理。經(jīng)常發(fā)生故障而被維修的公用工程是不能保證無菌生產(chǎn)的。

1.3 設(shè)備和工藝確認
在本驗證實施之前，所有的設(shè)備、無菌環(huán)境、計算機控制系統(tǒng)以及生產(chǎn)工藝都應(yīng)經(jīng)過驗證。產(chǎn)品暴露是發(fā)生污染使無菌工藝驗證失敗的主要原因之一，為防止或降低污染發(fā)生的幾率，給暴露產(chǎn)品提供層流空氣的百級層流罩是非常重要的；被滅菌過的物品由滅菌器到生產(chǎn)線的傳遞和經(jīng)由必要的手工操作進入生產(chǎn)線前的保護也是**關(guān)重要的，應(yīng)盡量避免人員對設(shè)備或物料的接觸的操作。這些都應(yīng)經(jīng)過驗證。

1.4 設(shè)備的清洗和滅菌
在無菌工藝驗證之前接觸模擬介質(zhì)的設(shè)備表面應(yīng)清洗滅菌，并防止滅菌后的再污染。若生產(chǎn)的藥品具有抗菌性或者殺菌性，這種清洗尤為重要。若清洗或滅菌不徹底，殘存的藥品會使模擬介質(zhì)受到污染或設(shè)備表面的微生物使模擬介質(zhì)染菌而使驗證失敗。這種清洗和滅菌過程應(yīng)經(jīng)過驗證，能保證清洗徹底和滅菌成功。

1.5 模擬介質(zhì)的選擇
選擇的模擬介質(zhì)應(yīng)有如下特征：沒有抑菌作用。這是顯而易見的，若模擬介質(zhì)有抑菌作用，將會對生產(chǎn)系統(tǒng)中的細菌生長產(chǎn)生抑制作用，以**于不能培養(yǎng)出細菌，產(chǎn)生假的結(jié)果。模擬介質(zhì)**好具有促進細菌生長的作用。如果選擇對細菌生長有促進作用的固體培養(yǎng)介質(zhì)做驗證，對生產(chǎn)環(huán)境的保護則特別重要。因為如果有些操作是使介質(zhì)暴露的，介質(zhì)的塵粒會飄散在某些較難清洗的地方，如空調(diào)系統(tǒng)的送風(fēng)口和回風(fēng)口附近，給細菌在該處的滋生創(chuàng)造了條件，所以應(yīng)有措施保護不易清洗的死角不被介質(zhì)污染。模擬介質(zhì)還應(yīng)在培養(yǎng)基內(nèi)有較好的溶解度。因為若溶解性能不好，懸浮在培養(yǎng)基中的模擬介質(zhì)使培養(yǎng)基發(fā)生混濁,影響結(jié)果的判斷。模擬介質(zhì)加入培養(yǎng)基后，不應(yīng)影響培養(yǎng)基的質(zhì)量，pH不發(fā)生大的變化，以適應(yīng)大多數(shù)細菌的生長。對設(shè)備沒有腐蝕性，對人體無害，對環(huán)境不發(fā)生污染。基于以上分析,通常可供選用的模擬介質(zhì)有PEG4000、PEG6000、乳糖和甘露醇等。

1.6 培養(yǎng)基
一般來說，應(yīng)針對不同的微生物選擇不同的培養(yǎng)基，比如硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基適用于需氧菌和厭氧菌，大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基適用于需氧菌和真菌。在無菌工藝驗證中事先不知道系統(tǒng)中存在什么樣的微生物，但分別選擇多種培養(yǎng)基分別做無菌測試也較難做到。應(yīng)根據(jù)實際的生產(chǎn)工藝和生產(chǎn)環(huán)境選擇適用于大多數(shù)微生物生長的培養(yǎng)基。比較之下，推薦用大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基，因為大多數(shù)無菌原料藥的生產(chǎn)都和空氣接觸，污染厭氧菌的幾率很小，而且被污染的微生物大多數(shù)為需氧菌或真菌。

1.7 模擬介質(zhì)的滅菌
驗證的結(jié)果受模擬介質(zhì)無菌性的影響很大，若不能保證它的無菌性，或在驗證之前受到了污染，則不能保證驗證結(jié)果的可信性。模擬介質(zhì)在使用之前應(yīng)滅菌。滅菌的方法很多，如γ射線滅菌，濕熱滅菌等等。不管是哪種滅菌方法，在確定滅菌參數(shù)后都應(yīng)對這種滅菌方法進行驗證。比如驗證γ射線滅菌，應(yīng)先測生物負荷量，根據(jù)生物負荷量得到所需要的吸收劑量。吸收劑量應(yīng)經(jīng)確認，可以用微生物吸收劑量計或者化學(xué)吸收劑量計確認吸收劑量。

1.8 培養(yǎng)基的滅菌
shou先選擇一種培養(yǎng)基滅菌的方法。一般地，培養(yǎng)基滅菌方法有γ射線滅菌法和濕熱滅菌法，選用的滅菌方法應(yīng)做驗證。培養(yǎng)基滅菌后應(yīng)做生長促進試驗。根據(jù)標準操作規(guī)程制備大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基并滅菌，將滅菌后的培養(yǎng)基分裝于預(yù)定數(shù)量的試管中(此數(shù)量應(yīng)有統(tǒng)計學(xué)意義)，在一半數(shù)量的試管中接枯草芽孢桿菌，接種量<100CFU；在另一半數(shù)量的試管中接種白色念珠菌，接種量<100CFU，接種后蓋塞，封口并在32.5±2.5℃和22.5±2.5℃分別培養(yǎng)7天，7天內(nèi)**少50%以上接種的各試管培養(yǎng)基中應(yīng)出現(xiàn)明顯的所接種微生物生長。#p#分頁標題#e#


2 驗證的實施

2.1 標準操作規(guī)程的確認以及人員培訓(xùn)
標準操作規(guī)程(SOP)是指導(dǎo)操作人員進行某項操作的書面程序，是操作人員的操作標準，是生產(chǎn)操作成功的關(guān)鍵。標準操作規(guī)程應(yīng)能對操作人員提供足夠的指導(dǎo)以完成本項操作。標準操作規(guī)程應(yīng)由技術(shù)人員編寫，部門主管審閱，質(zhì)量保證部主管批準。將批準后的標準操作規(guī)程對操作人員進行培訓(xùn)，使之真正理解并能熟練掌握。標準操作規(guī)程的原件及培訓(xùn)記錄存放在資料管理部門，操作現(xiàn)場存放的是復(fù)印件。驗證前應(yīng)確認每一項操作有標準可依，以免造成管理上的漏洞，且確認這項操作已被培訓(xùn)過，且操作人員已能熟練掌握。驗證之前應(yīng)對所有的操作人員和質(zhì)量管理人員培訓(xùn)與驗證有關(guān)的各項操作(可根據(jù)驗證方案和SOP)，以避免驗證過程中有關(guān)人員不理解甚**不知道怎么做，保證驗證的順利實施。如果新增加或調(diào)換了崗位操作人員，應(yīng)重新做無菌工藝驗證，以保證無菌操作能順利進行。人是生產(chǎn)中**重要的因素，也是容易被忽略的因素，這一點應(yīng)特別值得注意。

2.2 儀表校正
生產(chǎn)中的各項參數(shù)都是根據(jù)儀表來讀取的，由一個沒有校正過的儀表得到的參數(shù)或結(jié)果是不可靠的。由沒有校正過的儀表得到錯誤的結(jié)果而導(dǎo)致生產(chǎn)中的異常，這樣的情況并不少見。儀表校正應(yīng)由有資格的人員或單位來進行，并符合G家可追蹤的標準。儀表的校正頻率**少符合G家規(guī)定，并要根據(jù)使用頻率調(diào)整并嚴于此標準。使用頻率越高，儀表的磨損越厲害，校正頻率就應(yīng)越高。由沒有經(jīng)過校正的儀表得到的數(shù)據(jù)無效。

2.3 工藝條件
無菌原料藥的生產(chǎn)工藝具有其自己的特點：設(shè)備種類多，設(shè)備復(fù)雜，管路長，且不同的生產(chǎn)工藝有不同的特點，根據(jù)各自的特點選擇固體或液體模擬介質(zhì)。雖然盡量減少設(shè)備的內(nèi)部暴露和減少物料產(chǎn)品的暴露，但是不可避免的會有一些設(shè)備與外界環(huán)境相通，或是物料暴露在環(huán)境中，這些開口處應(yīng)有呼吸器或百級層流空氣的保護。驗證時應(yīng)有模擬這些物料暴露的操作。有些生產(chǎn)工藝中具有結(jié)晶的操作，這使得模擬過程有些困難，因為結(jié)晶過程中有相變產(chǎn)生，這種變化是否會影響到微生物的生長是一個值得考慮的問題。**好的辦法是選擇兩種模擬介質(zhì)，它們在結(jié)晶過程發(fā)生反應(yīng)生成另一種模擬介質(zhì)。選擇這樣的介質(zhì)可能會有很大困難。簡單起見，也可用同一種液體模擬介質(zhì)模擬結(jié)晶過程流經(jīng)所有管路加到結(jié)晶罐中。若結(jié)晶過程有加晶種的操作，模擬過程中也應(yīng)有這樣的操作。晶種可用模擬介質(zhì)代替。為使晶體粒度均勻，有些結(jié)晶過程有降溫過程，在模擬過程中不應(yīng)降溫，因為微生物在低溫下不易生長。干燥過程中的溫度一般會抑制微生物生長，甚**將微生物殺死，在模擬過程中應(yīng)保持室溫，以免溫度太高殺死細菌而使驗證失敗。也有用冷凍干燥除去濕分的，在這種情況下,模擬凍干參數(shù)的選擇也不應(yīng)使細菌的生長受到抑制。總之，在驗證過程中盡量使工藝參數(shù)和實際情況一致，但是為了使細菌生長，允許選擇的工藝參數(shù)和實際情況不一致，但是這些參數(shù)不應(yīng)和生產(chǎn)工藝產(chǎn)生重大差別。無菌原料藥的分裝劑量一般較大，在這種情況下在分裝過程中應(yīng)減慢分裝速度，以增加產(chǎn)品暴露的機會，在**差狀況進行操作。

2.4 操作時限
在原料藥的生產(chǎn)中每一操作都應(yīng)有操作時限來保證已滅菌的物品避免受到微生物的污染或產(chǎn)品降解。操作時限越長，產(chǎn)品受污染的幾率越大。在無菌工藝驗證時，應(yīng)將操作時限調(diào)整****大，在**差狀況下操作，如果這時驗證結(jié)果是可靠的，那么在小于此時間下進行的操作當然也是可靠的。尤其是已滅菌物品由滅菌到使用時的保存時間更加重要。在驗證時，應(yīng)將已滅菌物品**少放置到規(guī)定的保存時間，這樣的驗證結(jié)果更具有說服力。每一步操作都應(yīng)延長**甚**超過操作時限，這樣會使得總的工藝時間很長，但是這樣的驗證結(jié)果更能保證正常生產(chǎn)時的無菌狀態(tài)。

2.5 環(huán)境監(jiān)測
在驗證過程中環(huán)境的質(zhì)量是**關(guān)重要的，應(yīng)在惡劣的環(huán)境下進行操作，但是不能惡劣到使產(chǎn)品發(fā)生染菌的程度。一般地，采用增加操作人員的數(shù)量的辦法惡化環(huán)境。應(yīng)對環(huán)境進行監(jiān)測以評價驗證過程，所有暴露產(chǎn)品的操作都有監(jiān)測本區(qū)域的環(huán)境。環(huán)境監(jiān)測包括以下幾個項目：菌室的溫度、濕度、換氣次數(shù)、塵埃粒子、沉降菌、浮游菌、人員和表面微生物。沉降菌和浮游菌用培養(yǎng)皿進行測試，培養(yǎng)基為營養(yǎng)瓊脂。這種方法簡單且價格便宜。培養(yǎng)皿應(yīng)放置在微生物監(jiān)測史上情況**差的部位。在驗證過程中應(yīng)增加取樣的頻率，并且應(yīng)在分裝區(qū)域放2個以上的取樣培養(yǎng)皿連續(xù)暴露取樣，暴露時間應(yīng)為分裝的全過程，但不宜超過4個小時，否則營養(yǎng)瓊脂變干而不能提供足夠的營養(yǎng)使細菌不能長出。營養(yǎng)瓊脂在使用前應(yīng)做微生物生長促進試驗，方法同培養(yǎng)基的生長促進試驗，以保證營養(yǎng)瓊脂對微生物生長的適應(yīng)性。在環(huán)境監(jiān)測中使用了不適當?shù)臓I養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，微生物沒有長出來，產(chǎn)生了假的好的結(jié)果這種情況也時有發(fā)生，這使得生長促進試驗尤為重要。測試浮游菌可以用縫隙-瓊脂撞擊采樣法、離心采樣法、液體撞擊采樣法及膜過濾法。一般說來，浮游菌比沉降菌更能反映環(huán)境的質(zhì)量。表面微生物的測試可用擦拭法或Rodac碟。用擦拭法測表面微生物之前應(yīng)先測回收率。影響回收率的因素很多，包括微生物的種類和數(shù)量，不同的操作人員進行測試會得到不同的回收率，主要原因是擦拭時用力的大小，這里建議每個操作人員有自己的回收率數(shù)值。測試回收率時不要選擇生命脆弱的微生物，因為這些微生物被擦拭時會死去，產(chǎn)生不可信的結(jié)果。用Rodac碟測試表面微生物比較方便，但是這種測試會有營養(yǎng)物質(zhì)殘留在被測試的表面，應(yīng)清洗干凈，否則這是一個很大的污染。塵埃粒子測試可以采用不同類型的粒子計數(shù)器，目前G際上采用Royco，Climat，Coulter等。塵埃粒子監(jiān)測的結(jié)果應(yīng)能證明產(chǎn)品暴露的關(guān)鍵區(qū)域空氣質(zhì)量達到了100級潔凈區(qū)的空氣質(zhì)量標準。我G有指導(dǎo)環(huán)境監(jiān)測的G家標準，G際上流行的標準是FS209E，它對環(huán)境監(jiān)測及結(jié)果評價給出了很詳細的指導(dǎo)。#p#分頁標題#e#

2.6 工藝過程的模擬
由于一般原料藥生產(chǎn)工藝都經(jīng)過結(jié)晶過程，其間會發(fā)生相變，因此，無菌工藝驗證不可能完全按照原來的實際工藝來進行模擬。可采用分步驟完成的方法：(1)從原材料配制起，以水代料，不加原料，完全用純化水。經(jīng)過除菌過濾、結(jié)晶、過濾、洗滌幾個步驟后，從過濾器底部將水放掉。(2)放掉水后，將過濾器蒸汽滅菌，然后加入滅菌的模擬介質(zhì)。以下的干燥、粉碎、分裝步驟再按生產(chǎn)工藝進行。生產(chǎn)過程中可能有升溫、降溫過程，此時應(yīng)注意模擬介質(zhì)對溫度的敏感性。可通過實驗室考察。

2.7 工藝各步驟中的取樣
根據(jù)各自的生產(chǎn)工藝在每個工藝步驟中比如結(jié)晶、過濾、干燥等都應(yīng)取樣測試無菌，以評價該步驟的無菌性能，為發(fā)現(xiàn)解決無菌問題提供足夠的數(shù)據(jù)指導(dǎo)。取樣頻率和數(shù)量應(yīng)有代表性，否則測試結(jié)果失去統(tǒng)計學(xué)意義。樣品在從取出到測試的時間里不應(yīng)被污染，尤其是液體樣品污染的途徑很多可能性很大，諸多因素中時間是一個重要因素，樣品取出后**好立即測試，以免防止時間過長而被微生物污染。

2.8 樣品培養(yǎng)
陰性對照:在驗證過程中，隨機取出有代表性的一定數(shù)量的裝有培養(yǎng)基的包裝容器作為陰性對照。陽性對照:驗證過程中，隨機取出有代表性的一定數(shù)量的裝有模擬介質(zhì)的包裝容器，一半接種濃度為<100個微生物/0.1ml的枯草芽孢桿菌，另一半接種濃度為<100個微生物/0.1ml的白色念珠菌。接種后分別在適宜的溫度下培養(yǎng)7天，7天內(nèi)**少50%的接種包裝容器中有明顯的所接種微生物的生長，以此作為陽性對照。樣品培養(yǎng)：將分裝得到的產(chǎn)品在操作現(xiàn)場灌裝培養(yǎng)基，然后密封，檢查密封性。全部產(chǎn)品應(yīng)在適宜的溫度下培養(yǎng)14天，14天時檢查培養(yǎng)的全部樣品的微生物生長情況。若發(fā)現(xiàn)污染應(yīng)注明批號，包裝容器號，同時檢查密封情況。若有破損注明原因。污染的樣品應(yīng)做微生物鑒別，**少鑒別到種。

2.9 結(jié)果評價
在制劑中以污染水平不過0.1%為接受標準，但是在無菌原料藥生產(chǎn)中，包裝單位較大，得到的總分裝容器數(shù)一般較小，這使得抽樣測試和結(jié)果計算失去統(tǒng)計學(xué)意義。又因為生產(chǎn)批量是固定的，因此所有產(chǎn)品都應(yīng)被培養(yǎng)。若發(fā)現(xiàn)有一個容器長菌，就認為無菌生產(chǎn)工藝中有染菌的因素存在，應(yīng)立即停產(chǎn)，調(diào)查產(chǎn)生污染的原因，采取措施后重復(fù)做驗證。這樣的做法在無菌原料藥的無菌生產(chǎn)工藝驗證中是可以接受的。本驗證**少連續(xù)三批全部合格才可以認為此無菌生產(chǎn)工藝符合無菌要求。

3 **終報告
驗證完成之后應(yīng)起草一份**終報告，對以上內(nèi)容做一個簡要總結(jié)，包括以下內(nèi)容：驗證題目、參加驗證部門和人員、采用的工藝參數(shù)和操作時限、選擇的模擬介質(zhì)和培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件和**終結(jié)果、**終報告應(yīng)由企業(yè)質(zhì)量保證部主管批準。只有當**終結(jié)果合格并且**終報告經(jīng)過批準后，企業(yè)的無菌原料藥生產(chǎn)才能開始(或繼續(xù))進行。

4 再驗證
再驗證的目的就是保證無菌生產(chǎn)工藝沒有隨生產(chǎn)的運行產(chǎn)生污染的因素。應(yīng)有標準操作規(guī)程(SOP)對再驗證的頻率做規(guī)定。一般說來，新生產(chǎn)線在投產(chǎn)之前要做無菌工藝驗證，驗證通過后該生產(chǎn)線才能投入使用。正在運行的生產(chǎn)線應(yīng)每年**少做2次無菌工藝驗證，每個操作人員每年**少參加一次無菌工藝驗證。直接接觸藥品的生產(chǎn)崗位操作人員若有變動，應(yīng)對產(chǎn)品的無菌工藝做再驗證。