摘要 目的：選用的消毒劑（PROCESS VESPHENE II）能符合藥廠無菌室使用要求而進(jìn)行該消毒劑的驗(yàn)證。結(jié)果 PROCESS VESPHENE II經(jīng)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)和無菌室使用后環(huán)境監(jiān)測結(jié)果符合公司標(biāo)準(zhǔn)。
關(guān)鍵詞：PROCESS VESPHENE II 消毒劑 驗(yàn)證
制藥企業(yè)潔凈室通常都使用一種以上的消毒劑進(jìn)行潔凈室消毒。一般在選擇一個(gè)消毒劑時(shí)，應(yīng)考慮消毒劑是否能廣譜地殺滅微生物；對人體無害；無腐蝕性，對設(shè)備無污染；具有洗滌劑作用；具有穩(wěn)定性；作用迅速；不因有機(jī)物的存在而失去活性；產(chǎn)生所期望的后效作用；廉價(jià)。
我公司在進(jìn)行消毒劑供應(yīng)商調(diào)查過程中發(fā)現(xiàn)，奧星公司代理的美GSteris公司生產(chǎn)的消毒劑產(chǎn)品包裝輕巧（單劑量包裝），經(jīng)γ射線輻射滅菌，適合無菌室清潔消毒使用 ，結(jié)合公司實(shí)情，選擇了堿性苯酚類清潔消毒劑（PROCESS VESPHENE II）產(chǎn)品進(jìn)行驗(yàn)證。
1. 實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)
2. 1.1目的
消毒劑驗(yàn)證shou先是在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行對代表細(xì)菌的有效殺滅情況進(jìn)行確認(rèn)，符合要求后用于潔凈區(qū)域清潔，作環(huán)境驗(yàn)證。本方法通過特定的微生物與待確認(rèn)的消毒劑（使用濃度下）接觸后，對微生物進(jìn)行培養(yǎng)、計(jì)數(shù)，考察消毒劑的效果。
1. 2實(shí)驗(yàn)用具
2. 1.2.1 指示菌種
金黃色葡萄球菌
白色念珠球菌
1.2.2 SCD預(yù)制培養(yǎng)基平板 用于細(xì)菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)
按照SCD干粉培養(yǎng)基配制說明書制備，保存。
1.2.3 TSB液體培養(yǎng)基 用于細(xì)菌增殖培養(yǎng)
按照TSB干粉培養(yǎng)基配制說明書制備，保存。
1.2.4 無菌具塞試驗(yàn)管（15ml）
1.2.5 MILIPORE微生物限度試驗(yàn)過濾裝置
1.2.6 無菌純化水
MILI-Q超純水于121℃，15分鐘滅菌后冷卻備用。
1.2.7 無菌生理鹽水
0.9g氯化鈉溶于100ml的MILI-Q超純水，于121℃，15分鐘滅菌后冷卻備用。
1.3 待驗(yàn)證消毒劑（ PROCESS VESPHENE II）
1.3.1待驗(yàn)證消毒劑的配制
PROCESS VESPHENE II（1：128稀釋）：吸取該消毒劑2毫升，用無菌純化水稀釋**256毫升。然后分注10ml于無菌具塞試驗(yàn)管，共分注15管備用。
1.3.2 指示菌增殖培養(yǎng)物
取金黃色葡萄球菌、白色念珠球菌分別接種于TSB液體培養(yǎng)基，于23.5℃培養(yǎng)24-48小時(shí)即得，培養(yǎng)后微生物濃度應(yīng)不少于106個(gè)/ml。
1.3.3 驗(yàn)證用消毒劑的配制和準(zhǔn)備工作
按使用濃度稀釋消毒劑**500ml。
取10ml稀釋后的消毒劑分注于無菌具塞試驗(yàn)管。每種試驗(yàn)用微生物試驗(yàn)管分"5分鐘組"、"10分鐘組"和"15分鐘組"共3組，每組2支。
1.4 試驗(yàn)步驟（接種金黃色葡萄球菌）
1.4.1微生物的接種
取金黃色葡萄球菌增殖培養(yǎng)物0.2ml，分別接種于上述3組共6支盛有待驗(yàn)證消毒劑的無菌具塞培養(yǎng)管，輕輕搖動(dòng)，混合均勻，并立即開始計(jì)時(shí)。
1.4.2 過濾
5分鐘后取上述"5分鐘組"的接種細(xì)菌的消毒液，傾入過濾杯濾過；然后各用無菌生理鹽水50ml清洗濾膜，濾過，重復(fù)3次。同組另一支同上操作。
1.4.3 "10分鐘組"和"15分鐘組"的操作
消毒劑與細(xì)菌培養(yǎng)物懸浮液混合10分鐘后、15分鐘后，重復(fù)4.2**4.3的操作。
1.4.4 培養(yǎng)和計(jì)數(shù)
取下濾膜放入SCD預(yù)制培養(yǎng)基平板，含菌膜面向上。
于32.5℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)7天。
7天后在明亮處，對平板上的菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。
1.4.5 陽性對照
取金黃色葡萄球菌增殖培養(yǎng)物0.2ml于濾杯內(nèi)，加無菌純化水進(jìn)行梯度稀釋**濃度為10~100cfu/ml，取稀釋液體1m于SCD預(yù)制培養(yǎng)基平板后，按4.4培養(yǎng)和計(jì)數(shù)
1.5 接種白色念珠球菌的操作重復(fù)步驟4的操作。
1.6 試驗(yàn)結(jié)果
試驗(yàn)結(jié)果見下表1。
表1：PROCESS VESPHENE II消毒劑殺菌效果 單位：cfu/ml
|
時(shí)間 |
菌種 |
PROCESS VESPHENE Ⅱ |
|
5分鐘 |
金黃色葡萄球菌 |
0 |
0 |
|
白色念珠球菌 |
0 |
0 |
|
10分鐘 |
金黃色葡萄球菌 |
0 |
0 |
|
白色念珠球菌 |
0 |
0 |
|
15分鐘 |
金黃色葡萄球菌 |
0 |
0 |
|
白色念珠球菌 |
0 |
0 |
|
陽性對照 |
金黃色葡萄球菌 |
培養(yǎng)24小時(shí)后即為TNTC |
|
白色念珠球菌 |
培養(yǎng)24小時(shí)后即為TNTC |
*備注："TNTC"為細(xì)菌太多而無法計(jì)數(shù)的英文縮寫。#p#分頁標(biāo)題#e#
1.7 結(jié)論
消毒劑PROCESS VESPHENE II按照其產(chǎn)品標(biāo)簽的標(biāo)示稀釋濃度進(jìn)行配置后，在5分鐘時(shí)便能有效殺滅105金黃色葡萄球菌和白色念珠球菌。
2 潔凈室使用后的環(huán)境驗(yàn)證
2.1潔凈室空氣凈化系統(tǒng)恢復(fù)
確認(rèn)空氣潔凈級別不同的相鄰房間之間的靜壓差符合GMP對潔凈室管理的要求。
2.2潔凈室清潔
生產(chǎn)車間崗位操作人員，使用滅菌注射用水，按PROCESS VESPHENE II標(biāo)簽上標(biāo)示使用濃度稀釋后，按照SOP規(guī)定的潔凈室清潔消毒方法，分別擦拭1萬級（包括萬級內(nèi)的局部100級）、10萬級房間地板、工作臺(tái)面和墻面等區(qū)域。
2.3清潔后第2日，由品管人員到車間潔凈區(qū)域?qū)Νh(huán)境采樣，采樣項(xiàng)目有表面菌、沉降菌和浮游菌數(shù)，連續(xù)隔日測定，共測定3次。
2.4測定結(jié)果
各潔凈區(qū)域測定結(jié)果見下列表（2、3、4）。
表2.環(huán)境監(jiān)測表面附著菌測定結(jié)果 單位：cfu/皿
|
區(qū)域 |
潔凈級別 |
平均菌數(shù) |
|
**次 |
第二次 |
第三次 |
|
稱量區(qū) |
100 |
0 |
0 |
0 |
|
10，000 |
3.4 |
2.5 |
8.5 |
|
100，000 |
5 |
6 |
10.5 |
|
配液區(qū) |
10，000 |
0.5 |
1 |
0.3 |
|
100，000 |
7 |
2 |
7 |
|
灌封區(qū) |
100 |
0.4 |
0.6 |
0.2 |
|
10，000 |
2 |
12.5 |
1 |
|
100，000 |
0 |
5 |
4 |
|
洗凈區(qū) |
100，000 |
15.5 |
9 |
19.5 |
表3.環(huán)境監(jiān)測沉降菌測定結(jié)果 位：cfu/皿
|
區(qū)域 |
潔凈級別 |
平均菌數(shù) |
|
**次 |
第二次 |
第三次 |
|
稱量區(qū) |
100 |
0 |
0 |
0.2 |
|
10，000 |
０ |
0 |
1.4 |
|
100，000 |
１ |
0 |
4.5 |
|
配液區(qū) |
10，000 |
０ |
0 |
0 |
|
100，000 |
０ |
0 |
0 |
|
灌封區(qū) |
100 |
０ |
0.2 |
0 |
|
10，000 |
０.9 |
0.1 |
0 |
|
100，000 |
1 |
4 |
0 |
|
洗凈區(qū) |
100，000 |
0 |
1 |
0.5 |
#p#分頁標(biāo)題#e#
表4.證環(huán)境監(jiān)測浮游菌測定結(jié)果 單位：cfu/m3
|
區(qū)域 |
潔凈級別 |
平均菌數(shù) |
|
**次 |
第二次 |
第三次 |
|
稱量區(qū) |
100 |
0 |
1 |
4 |
|
10，000 |
０ |
6 |
0 |
|
100，000 |
50 |
2 |
70 |
|
配液區(qū) |
10，000 |
2 |
2 |
2 |
|
100，000 |
30 |
2 |
0 |
|
灌封區(qū) |
100 |
０ |
0 |
0 |
|
10，000 |
4 |
4 |
4 |
|
100，000 |
80 |
30 |
0 |
|
洗凈區(qū) |
100，000 |
20 |
80 |
30 |
注：采樣量為100級1000升，1萬級500升，10萬級100升。
浮游菌濃度計(jì)算公式：（菌落數(shù)×1000）/ 采樣量
以上表2、3、4的環(huán)境測定結(jié)果表明，所監(jiān)測的潔凈區(qū)的微生物均在公司環(huán)境質(zhì)量控制范圍內(nèi)，各潔凈區(qū)符合各自的潔凈級別要求。
3 結(jié)論
消毒劑PROCESS VESPHENE II的驗(yàn)證結(jié)果表明，該消毒劑適用于潔凈室常規(guī)的清潔消毒，并能用于潔凈室的日常潔凈維護(hù)。
