III級生物安全柜專為與生物安全級別4（BSL-4）微生物制劑配合工作而設計，為環境和工作人員提供**大限度的保護。它是一個氣密的外殼，帶有非開口的完全密封的觀察窗。進入內閣的內部是通過一個雙門傳遞“交換”箱（如高壓滅菌器），可可以在使用和/或灌裝槽之間進行凈化，可通過櫥柜地板進入地板I類或II類內閣。反轉該過程可以安全地從III類生物安全柜中取出材料。
 
供應和排氣都經過HEPA過濾。在排放到室外之前，排氣必須通過兩個HEPA過濾器，或一個HEPA過濾器和一個空氣焚化爐。空氣流量由柜體外部的專用獨立排氣系統維持，使柜體和所有相關管道保持負壓（通常約為0.5英寸的水壓）。
 
長而耐用的橡膠手套以氣密方式連接到機柜的端口，并應允許更換而不會影響密封。盡管這些手套限制了機柜內部隔離材料的移動，但它們可以防止用戶直接接觸危險材料。權衡顯然是為了**大限度地提高人身安全。
 
根據機柜的設計，HEPA過濾器可在工作環境內提供無顆粒，有點湍流的氣流。然而，為了盡量減少內部紊流，應將流入的空氣引導**位于工作表面正上方的后壁上的分配歧管。分配歧管還提供了容納防靜電條的手段，沐浴塑料材料同時具有正離子和負離子。
 
多個III級機柜可以通過“線路”連接在一起，以提供更大的工作區域。這種機柜線路是定制的; 安裝在機柜內的設備（例如冰箱，小電梯，用于放置小型動物籠架，顯微鏡，離心機，孵化器等的貨架）通常也是定制的。此外，III類機柜通常只安裝在有控制通道并需要特殊通風或其他支持系統（如高壓滅菌器蒸汽）的**大密封實驗室中。